Ten artykuł będzie poświęcony zjawisku reakcji strącania. Tutaj rozważymy cechy sformułowania tego zjawiska, zjawisko dyfuzji, ogólną charakterystykę, rolę w życiu człowieka i wiele więcej.
Wprowadzenie do zjawiska
Wytrącanie jest zjawiskiem typu serologicznego, podczas którego rozpuszczalne antygeny wchodzą w interakcję z przeciwciałami, w wyniku czego obserwuje się wytrącanie – osad.
Ogólną cechą reakcji wytrącania jest forma skoordynowany wpływ antygenu i przeciwciała. Tego typu oddziaływania umożliwiają określenie obecności nieznanych antygenów w badanej substancji poprzez dodanie znanych przeciwciał i antygenów. Proces strącania bez obecności soli będzie przebiegał gorzej, a najlepsze optimum leży w zakresie pH 7,0-7,4.
Składniki reakcji
Wśród składników reakcji strącania są trzy główne elementy:
- Antygen o charakterze molekularnym. Jest w dobrym stanie, innymi słowy, torozpuszczalny. Taki antygen nazywany jest również precipitogenem, który jest lizatem lub ekstraktem tkankowym itp. Precipitogen ma charakterystyczną różnicę od aglutynogenu, która polega na wielkości cząstek, z których się składa. Aglutynogen ma wrodzoną wielkość komórki, a precypitogeny są współmierne do wielkości cząsteczki. Roztwór antygenu charakteryzuje się przezroczystością.
- Przeciwciało znalezione w ludzkiej surowicy krwi, a także w immunodiagnostycznej surowicy, która zawiera badane przeciwciała.
- Elektrolity to roztwory chlorku sodu, które są izotoniczne.
Produkcja osadu
Wywołanie reakcji precypitacji jest niemożliwe bez precypitogenu, który uzyskuje się przez mielenie materiałów i ekstrahowanie z nich antygenów białkowych. Ekstrakcja odbywa się przez gotowanie lub innymi metodami.
Uderzają lizaty, a także ekstrakty tkanek i narządów, surowica krwi, różnego rodzaju filtraty na bazie kultur bulionowych drobnoustrojów, a także solny ekstrakt z mikroorganizmów i substancje autolizatowe. przykład precypitogenów.
Konfiguracja podczas opadów
Rozważmy teraz sposób uruchomienia reakcji strącania.
Przeprowadzana jest reakcja strącania pierścieniowego, która zachodzi w specjalnie przygotowanych probówkach. Serum wprowadza się do wnęki naczyń, wylewając ją na ścianę za pomocą dziobka do pipety. Następnie odpowiednią ilość precypitatu nakłada się na wierzch, a następnie rurkę ustawia się w pozycji pionowej od poziomej. Ustawienie i uwzględnienie reakcji strącania jest operacją bardzo drobiazgową. Wynik jest rejestrowany po pojawieniu się białego pierścienia na granicy antygenu i przeciwciała. Jeśli reagujące elementy reakcji odpowiadają sobie nawzajem, wówczas wiążą się, ale staje się to zauważalne po długim okresie ich wzajemnego oddziaływania.
Reakcja wytrącania jest również przeprowadzana na szalce Petriego lub na szkle szkiełko, na które przenosi się żel agarowy, nakładając go niewielką warstwą. Po stwardnieniu w żelu wycina się niewielką liczbę dołków, w których zostaną umieszczone antygeny i przeciwciała. Istnieją dwa sposoby wykonania tej czynności: metoda immunodyfuzji radialnej i metoda podwójnej immunodyfuzji.
Informacje ogólne
Mechanika pracy opadów jest podobna do działania urządzenia do aglutynacji. Pod wpływem surowicy typu immunologicznego antygen, który już wszedł w reakcję, zmniejsza stopień jej dyspersji. Ważnym warunkiem jest przezroczystość zarówno surowicy, jak i antygenu.
Możesz poprawić rejestrację reakcji, jeśli nałożysz antygeny na przeciwciała. W rezultacie można zaobserwować pojawienie się osadów w postaci pierścienia. Zjawisko to nazywane jest wytrącaniem pierścieniowym i odbywa się w specjalnych rurkach o średnicy od 2,5 do 3,5 mm. Jednym z najczęstszych przykładów reakcji strącania jest diagnostyka wąglika.
Opad umożliwia określenie poziomu toksygenności hodowli błonicy na agarze.
Podczas rozważanej reakcjiwystępuje wytrącanie kompleksów antygenowych i przeciwciał. Opady atmosferyczne to zjawisko immunologiczne, które pozwala określić ilość przeciwciał w surowicy krwi osoby chorej lub zaszczepionej oraz zwierząt.
Konsekwencja miareczkowania
Ważne jest, aby wiedzieć, że danych uzyskanych w wyniku miareczkowania powyższą metodą nie można określić ilościowo. Aby stworzyć i przeanalizować ilościową ocenę zawartej liczby przeciwciał, M. Heidelberger i E. Kabat opracowali specjalną technikę reakcji, która opiera się na poszukiwaniu i identyfikacji strefy równoważności. Mieszanie liczby wiekowej antygenów ze stałą objętością surowicy odpornościowej prowadzi do wzrostu początkowo utworzonego osadu, a następnie ponownie zmniejsza się ze względu na wzrost zdolności do rozpuszczania kompleksów antygenowych. Określając ilość przeciwciał w supernatantach zawartych w każdej probówce, można stwierdzić, że w określonej liczbie naczyń z przeciwciałami będzie brakować płynu. Tutaj, w porównaniu z innymi probówkami, powstanie największy osad. Dzięki temu i odjęciu osadu antygenowego białka od całkowitej wartości białek, możliwe jest uzyskanie dokładnej wartości przeciwciał zawartych w objętości badanej specyficznej surowicy. Ponadto ilość cząsteczek białka w osadzie jest określana przez ilość azotu lub za pomocą metod kolorymetrycznych.
Ocena wartości
Oszacowanie wartości wytrącania w metodologii diagnostycznej powinno uwzględniać możliwość obecności w surowicy odpornościowej przeciwciała, które nie ma właściwości precypityny, z czego wynika, że sam osad może nie być powstały po reakcji z antygenami. Lista takich cząsteczek obejmuje niekompletne przeciwciała oraz niektóre gatunki z grupy globulin gamma-A.
Reakcja strącania w warunkach laboratoryjnych znajduje zastosowanie w różnego rodzaju modyfikacjach. Na przykład reakcja termoprecypitacji służy do wykrywania antygenów bakterii zatrucia jadem kiełbasianym, wąglika itp., które nie ulegają denaturacji termicznej. W przeciwieństwie do strącania pierścieniowego, w tym typie reakcji wykorzystuje się filtraty badanego materiału w stanie warzonym.
Analiza reakcji strącania w złożonej mieszaninie nie pozwala na scharakteryzowanie właściwości poszczególnych składników mieszaniny. W takich przypadkach osoba ucieka się do metody precypitacji w agarze, a także do immunoelektroferezy.
Rozproszone opady
W tym obszarze badań istnieje koncepcja reakcji strącania rozproszonego (RPD). Opiera się na zdolności do dyfuzji w żelu przeciwciał i rozpuszczalnych antygenów. Dyfuzja to zdolność cząsteczki danej substancji do wnikania w cząsteczki innej, co jest spowodowane ruchem termicznym.
Żel to układ typu rozproszonego, w którym faza ciekła jest rozprowadzona równomiernie w fazie stałej. Najczęściej do takiej reakcji stosuje się żel agarowy.
Po podaniu parametrów, wwarunkach, w których cząsteczki mogą dyfundować względem siebie, ich spotkaniu będzie towarzyszyć tworzenie kompleksu antygen + przeciwciało. Taki nowotwór jest w stanie dyfundować, będąc w samym żelu, i wytrąca się, przybierając postać paska, który można wykryć gołym okiem. Jeśli antygen i przeciwciało są homologiczne, nie utworzy się prążek.
Stworzenie warunków, w których będzie miała miejsce dyfuzja w warstwie agaru, wymaga wylania składników, ale całkowita liczba dołków i ich względne położenie są określane przez zdecydować, jaki rodzaj zadania jest wymagany. RPD daje osobie możliwość wykrywania i identyfikowania nieznanych izolowanych wirusów poprzez testowanie przy użyciu znanych surowic przeciwciał.
Aplikacja
Opady mają szerokie zastosowanie nie tylko w diagnostyce chorób, ale również znajdują zastosowanie w kryminalistyce. Trudno sobie wyobrazić analizę, w której można by określić gatunek krwi, fragmentu organu lub tkanki znalezionej na broni kryminalnej, która nie wykorzystuje reakcji strącania. Podczas tego procesu wykorzystywane są strącające surowice, które uzyskuje się poprzez immunizację różnych zwierząt i ptaków. Ważne jest, aby poziom miana w surowicy nie był niższy niż 1:10000, a także musi mieć wystarczającą swoistość. Z wykrytej plamki krwi lub jej skorupy sporządza się ekstrakt do celów fizycznych. rozwiązanie, które będzie dalej narażone nawytrącające serum. Zgodnie z tą reakcją możliwe jest ustalenie rodzajów białek tkankowych i narządowych zarówno ludzi, jak i zwierząt. Uzyskanie mętnych ekstraktów zmusza do uciekania się do strącania na agarze.
Wnioski
Analizując odczytane informacje, możemy stwierdzić, że reakcje wytrącania są niezwykle ważne dla człowieka, ponieważ pozwalają na diagnozowanie różnych antygenów za pomocą przeciwciał, zjawisko to jest również szeroko stosowane w kryminalistycznych badaniach lekarskich i pozwala zidentyfikować rodzaj krew, tkanka lub narząd w odniesieniu do konkretnego podmiotu. Istnieje kilka rodzajów i metod opadów, które stosuje się zgodnie z pojawiającymi się potrzebami rozwiązywanego problemu.
