Każda cząsteczka, czy to cząsteczka, atom czy jon, w wyniku absorpcji kwantu światła przechodzi na wyższy poziom energetyczny. Najczęściej następuje przejście ze stanu podstawowego do stanu wzbudzonego. Powoduje to pojawienie się pewnych pasm absorpcyjnych w widmach.
Pochłanianie promieniowania prowadzi do tego, że gdy przechodzi ono przez substancję, intensywność tego promieniowania maleje wraz ze wzrostem liczby cząstek substancji o określonej gęstości optycznej. Ta metoda badawcza została zaproponowana przez V. M. Severgina już w 1795 roku.
Ta metoda najlepiej nadaje się do reakcji, w których analit jest w stanie przekształcić się w barwny związek, co powoduje zmianę koloru roztworu testowego. Mierząc jego absorpcję światła lub porównując kolor z roztworem o znanym stężeniu, łatwo jest określić procent substancji w roztworze.
Podstawowe prawo pochłaniania światła
Istotą oznaczania fotometrycznego są dwa procesy:
- transfer analitu dozwiązek absorbujący;
- pomiar intensywności pochłaniania tych samych drgań przez roztwór substancji badanej.
Zmiany natężenia światła przechodzącego przez materiał pochłaniający światło będą również spowodowane utratą światła w wyniku odbicia i rozproszenia. Aby wynik był wiarygodny, prowadzone są równoległe badania mające na celu pomiar parametrów przy tej samej grubości warstwy, w identycznych kuwetach, z tym samym rozpuszczalnikiem. Zatem spadek natężenia światła zależy głównie od stężenia roztworu.
Spadek natężenia światła przechodzącego przez roztwór charakteryzuje się współczynnikiem przepuszczalności światła (zwanym również jego przepuszczalnością) T:
Т=I / I0, gdzie:
- I - intensywność światła przechodzącego przez substancję;
- I0 - intensywność wiązki światła padającego.
W związku z tym transmisja pokazuje proporcję niezaabsorbowanego strumienia światła przechodzącego przez badany roztwór. Algorytm odwrotnej wartości transmisji nazywa się gęstością optyczną roztworu (D): D=(-lgT)=(-lg)(I / I0)=lg(I 0 / I).
To równanie pokazuje, które parametry są głównymi parametrami do badań. Obejmują one długość fali światła, grubość kuwety, stężenie roztworu i gęstość optyczną.
Prawo Bouguera-Lamberta-Beera
Jest to wyrażenie matematyczne, które przedstawia zależność spadku natężenia monochromatycznego strumienia świetlnego od stężeniachłonnego i grubości warstwy cieczy, przez którą przechodzi:
I=I010-ε·С·ι, gdzie:
- ε - współczynnik pochłaniania światła;
- С - stężenie substancji, mol/l;
- ι - grubość warstwy analizowanego rozwiązania, patrz
Po przekształceniu wzór ten można zapisać: I / I0 =10-ε·С·ι.
Istota prawa jest następująca: różne roztwory tego samego związku o równym stężeniu i grubości warstwy w kuwecie pochłaniają tę samą część padającego na nie światła.
Biorąc logarytm z ostatniego równania, możesz otrzymać wzór: D=εCι.
Oczywiście gęstość optyczna zależy bezpośrednio od stężenia roztworu i grubości jego warstwy. Fizyczne znaczenie molowego współczynnika absorpcji staje się jasne. Jest równy D dla roztworu jednomolarnego i grubości warstwy 1 cm.
Ograniczenia w stosowaniu prawa
Ta sekcja zawiera następujące elementy:
- Dotyczy tylko światła monochromatycznego.
- Współczynnik ε jest związany ze współczynnikiem załamania światła ośrodka, szczególnie silne odchylenia od prawa można zaobserwować podczas analizy roztworów o wysokim stężeniu.
- Temperatura podczas pomiaru gęstości optycznej musi być stała (w zakresie kilku stopni).
- Wiązka światła musi być równoległa.
- PH medium musi być stałe.
- Prawo dotyczy substancjiktórych centra pochłaniające światło są cząsteczkami tego samego typu.
Metody określania stężenia
Warto rozważyć metodę krzywej kalibracyjnej. Aby go zbudować należy przygotować serię roztworów (5-10) o różnych stężeniach substancji badanej i zmierzyć ich gęstość optyczną. Zgodnie z uzyskanymi wartościami wykreśla się wykres D w funkcji stężenia. Wykres jest linią prostą od początku. Pozwala w prosty sposób określić stężenie substancji na podstawie wyników pomiarów.
Istnieje również metoda dodawania. Jest używany rzadziej niż poprzedni, ale pozwala analizować rozwiązania o złożonym składzie, ponieważ uwzględnia wpływ dodatkowych składników. Jego istotą jest wyznaczenie gęstości optycznej ośrodka Dx, zawierającego analit o nieznanym stężeniu Сx, z wielokrotną analizą tego samego roztworu, ale z dodanie pewnej ilości składnika testowego (Сst). Wartość Cx można znaleźć za pomocą obliczeń lub wykresów.
Warunki badania
Aby badania fotometryczne dały wiarygodne wyniki, należy spełnić kilka warunków:
- reakcja musi zakończyć się szybko i całkowicie, selektywnie i powtarzalnie;
- kolor powstałej substancji musi być stabilny w czasie i nie zmieniać się pod wpływem światła;
- substancja badana jest pobierana w ilości wystarczającej do przekształcenia jej w postać analityczną;
- pomiarygęstość optyczną przeprowadza się w zakresie długości fal, w którym różnica w absorpcji odczynników wyjściowych i analizowanego roztworu jest największa;
- Pochłanianie światła przez roztwór odniesienia jest uważane za optyczne zero.