Współczesna medycyna dysponuje specyficznymi metodami diagnostycznymi, które umożliwiają ustalenie etiologii chorób u ludzi na podstawie definicji patogenu, substancji genetycznie obcych stymulujących odpowiedź immunologiczną, kwasów nukleinowych, a także zmian alergicznych i immunologicznych które pojawiają się z powodu jego działań. Dzisiaj RIA jest szeroko stosowana w immunologii i wirusologii, to znaczy radioimmunologii, cele ustalania, składniki, przebieg, których rozliczanie rozważymy w tym artykule. Ten test jest w stanie wykryć antygeny w wyniku ich interakcji z przeciwciałami.
Definicja
RIA to metoda diagnozowania substancji biologicznie czynnych w cieczach, która opiera się na reakcji antygenów z przeciwciałami przy użyciu analogicznych substancji znakowanych radionuklidami, które mają specjalne układy wiązania. Po ich interakcjipowstaje kompleks immunologiczny, który jest oddzielany i badana jest jego radioaktywność. Wiadomo, że test radioimmunologiczny przeprowadza się przy użyciu standardowych zestawów odczynników.
Każdy odczynnik jest w stanie określić stężenie jednej konkretnej substancji. Płyn biologiczny pobrany od osoby miesza się z odczynnikiem, po okresie inkubacji oddziela się wolne i związane substancje radioaktywne, następnie przeprowadza się radiometrię i oblicza wyniki. Do znakowania substancji stosuje się izotop jodu. Jest oznaczany i dodawany w określonej ilości.
Aplikacja
Analiza radioimmunologiczna ma szerokie zastosowanie w medycynie i mikrobiologii. Służy do diagnozowania chorób serca i naczyń krwionośnych, chorób endokrynologicznych i innych układów organizmu. RIA są również często wykorzystywane do identyfikacji przyczyny niepłodności, patologii rozwoju płodu. W onkologii analiza ta jest przeprowadzana w celu określenia markerów nowotworów, aby móc monitorować skuteczność leczenia. W immunologii RIA służy do badania obecności immunoglobulin, enzymów, białek itd. we krwi. Dziś ta analiza pozwala wykryć stężenie różnych hormonów do jednej milionowej grama. Tak więc radioimmunologiczna analiza krwi jest szeroko stosowana w kardiologii, onkologii, endokrynologii, ginekologii i wirusologii.
Metody RIA
Zwyczajowo rozróżnia się kilka metod analizy, w zależności od charakterureakcje:
- Metoda niekonkurencyjna charakteryzuje się takimi składnikami reakcji jak standardowe i wykrywalne antygeny, roztwór buforowy, przeciwciała znakowane izotopowo, określone przeciwciała wiążące się z sorbentem. Do testowanych przeciwciał dodawany jest antygen. Po inkubacji pojawiają się kompleksy antygen-przeciwciało, sorbent jest przemywany, dodawane są znakowane przeciwciała, które wiążą się z antygenem w kompleksie. Radioaktywność zależy od stężenia testowanego antygenu.
- Konkurencyjny test radioimmunologiczny jest napędzany przez współzawodnictwo antygenowe. Znajdują się tu takie składniki reakcji, jak antygeny kontrolne i oznaczane, roztwór buforowy, określone przeciwciała wiążące się z sorbentem, a także antygen znakowany izotopowo. Diagnoza rozpoczyna się od wprowadzenia badanego antygenu. Na sorbencie tworzy się kompleks antygen-przeciwciało. Następnie sorbent jest przemywany i wstrzykiwany jest znakowany antygen. W ten sposób wiąże się z przeciwciałem. Za pomocą liczników mierzy się reakcję i ilość radioaktywności. Będzie odwrotnie proporcjonalna do ilości antygenu w próbce.
- Najpowszechniejsza jest metoda pośrednia. W tym przypadku test radioimmunologiczny składnika reakcji obejmuje np. surowicę kontrolną i testową, antygeny lub przeciwciała, które są związane na sorbencie, przeciwciała znakowane izotopami, roztwory buforowe. Zdiagnozowane przeciwciała lub antygeny reagują z antygenami lub przeciwciałami związanymi z sorbentem. Następnie inkubator jest usuwany, wstrzykuje się znakowane przeciwciała, które wiążą się zkompleksy antygen-przeciwciało.
Metodologia analizy
Tak więc test radioimmunologiczny jest przeprowadzany przy użyciu specjalnych odczynników. Zestawy są standardowe, więc wszelkie błędy lub naruszenia są niedopuszczalne. Wyniki diagnostyczne są wiarygodne. Analizę przeprowadza się rano, w tym celu pobierają krew żylną od osoby. W laboratorium oddziela się surowicę od krwi, która zostanie wykorzystana do RIA. Ta surowica jest mieszana z odczynnikami. Otrzymaną mieszaninę inkubuje się w danej temperaturze w termostacie.
W powstałej mieszaninie rozdzielane są izotopy wolne i związane. Następnie otrzymany materiał jest badany, a wyniki są obliczane. Mechanizm radioimmunologiczny ma kilka opcji. Opisana powyżej technika to RIA w fazie ciekłej, ponieważ wszystkie składniki są w stanie ciekłym. Istnieje RIA i faza stała, gdzie przeciwciała są umieszczane w nośniku, który nie rozpuszcza się w cieczy.
Dostępność diagnostyki
Zastosowanie tej metody diagnostycznej w medycynie z roku na rok staje się coraz bardziej popularne. Ostatnio radioimmunotest stał się standardową metodą diagnostyczną, którą lekarz może przepisać podczas ostatecznej diagnozy. Przez długi czas tego typu analizy były prowadzone wyłącznie w laboratoriach, dziś stały się powszechną metodą badawczą. Jednak RIA wymaga użycia drogiego sprzętu (liczników gamma), a zestawy odczynników mają krótki okres użytkowania. Wszystko to jest główną wadą takiej analizy, która decyduje o jejdrogi koszt.
Ponadto, RIA zaczęła ostatnio wypierać bardziej nowoczesne metody badawcze, które nie wymagają interakcji z izotopami. Należą do nich enzymatyczny test immunologiczny. Dlatego RIA jest pożądana w wielu klinikach. Jest od dawna stosowany w dużych miastach i centrach diagnostycznych, ale w zwykłych szpitalach w małych miejscowościach ta analiza praktycznie nie jest stosowana ze względu na jej wysoki koszt.
Godność RIA
Test radioimmunologiczny ma wiele zalet. Jest dość specyficzny i ma wysoką czułość, co pozwala na stwierdzenie obecności substancji biologicznie czynnych w niewiarygodnie małych ilościach. Ta analiza jest przeprowadzana bardzo prosto, od osoby wymaga się jedynie oddania krwi żylnej. Wyniki testów są w 100% dokładne i gotowe już następnego dnia. RIA można również łatwo zautomatyzować. Tak więc analiza ta pozwala zidentyfikować białka, które są produktami odpadowymi bakterii zakaźnych, co wskazuje na obecność infekcji w organizmie.
Diagnostyka w wirusologii
Najbardziej obiecująca metoda RIA dotyczy wirusologii, ponieważ umożliwia szybką identyfikację patogenów wirusowych. Wynika to z faktu, że w ostatnich latach rośnie zachorowalność na różne infekcje, które rozprzestrzeniają się w szybkim tempie, powodując śmiertelność wśród ludzi. Dotyczy to zwłaszcza krajów, które nie mają wysokiego poziomurozwoju społeczno-gospodarczego (kraje Dalekiego Wschodu), radioimmunotest jest tu po prostu niezbędny. Mikrobiologia wykorzystuje również tę metodę diagnostyczną do wykrywania chorób zakaźnych wywołanych przez bakterie chorobotwórcze. Na przykład RIA jest szeroko stosowana do wykrywania duru brzusznego. W pierwszych dniach choroby, przed wyznaczeniem leczenia, konieczne jest przeprowadzenie badania kału i wymiotów. Jednak wyniki diagnostyczne zostaną uzyskane po długim czasie. Tutaj na ratunek przychodzi RIA, analiza pozwala w krótkim czasie zidentyfikować czynnik sprawczy choroby. Osoba oddaje krew, następnego dnia wyniki badania są gotowe. Ta analiza pomaga w postawieniu trafnej diagnozy.
Wyniki
Radioimmunotest jest obecnie jedną z najczulszych metod diagnostycznych. Służy do analizy każdej substancji, przeciwko której można uzyskać przeciwciała. Metoda ta umożliwia wykonanie wielu próbek w najmniejszej objętości badanej cieczy, a także rejestrację wyników w możliwie najkrótszym czasie, ponieważ może być w pełni zautomatyzowana. Analiza ta została opracowana w latach pięćdziesiątych przez Solomona Bursona. Trzydzieści lat później stało się powszechne. Do tej pory nie ma stuprocentowej alternatywy dla OSR, ponieważ analiza ma dużą czułość. RIA znajduje zastosowanie w różnych gałęziach medycyny, a także w mikrobiologii i wirusologii.
Wreszcie
Wykorzystanie metody w wirusologii jest dziś bardzo istotne, ponieważ dajeumiejętność zbadania rozprzestrzeniania się infekcji, postawienia dokładnej diagnozy i przepisania konkretnego leczenia. Problem ten jest szczególnie istotny dla krajów o niskim poziomie rozwoju gospodarczego i społecznego. Ponadto ta analiza pozwala wykryć ilość hormonów i enzymów w ludzkim ciele. Aby uzyskać wiarygodne wyniki, badacz musi jedynie oddać krew do analizy. Medycyna nie stoi w miejscu, wraz z radioimmunotestami pojawiają się nowe metody badawcze, ale RIA nadal jest jednym z liderów diagnostyki medycznej.
